液相色譜分析柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

1、樣品的前處理：

a、使用流動相溶解樣品。

b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

2、流動相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。

f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流動相流速的選擇：

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

當(dāng)選用*流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙*的含量)。

 

以下幾種情況建議保護(hù)液相色譜分析柱：

　　1、中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析--因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴(yán)重，梯度洗脫時影響更大。

　　2、生物樣品分析--因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染，保護(hù)柱可先于分析柱承受這種污染，從而延長分析柱壽命。

　　保護(hù)液相色譜分析柱很重要，但選擇合適的保護(hù)柱更重要，選擇或使用不當(dāng)也可能帶來截然相反的效果。